GISH-武漢貝科新肽科技公司(圖)
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武漢貝科新肽科技有限公司
- 主營業務:原位雜交,亞細胞定位,蛋白互作,啟動子篩選
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植物組織原位雜交技術在植物基因表達和調控研究中具有廣泛的應用。它可以用來研究植物發育、生長、逆境響應等方面的基因表達模式和調控機制。例如,可以利用該技術研究植物中的轉錄因子、信號轉導通路、代謝途徑等基因的表達和調控。此外,植物組織原位雜交技術還可以用來鑒定植物中的病原體、檢測植物等方面。
總之植物組織原位雜交技術是一種重要的分子生物學技術,GISH,可以用來研究植物基因的表達和調控。它具有操作簡便、結果可靠、應用廣泛等優點,是植物分子生物學研究中不可或缺的工具。

在ISHH,整個實驗周期是比較長的,實驗程序也比較繁雜,而雜交在ISHH整個實驗中可被認為是“短兵相接”的一步。雜交前的一切準備工作如增加組織通透性都是為了在雜交這一步驟中核酸探針能進入細胞或組織與其內的靶核苷酸相結合。因此,雜交是ISHH中關鍵的而且是重要的一個環節。雜交是將雜交液滴于切片組織上,加蓋硅化的蓋玻片,防止孵育過程中的高溫(50℃左右)導致雜交液的蒸發。為保證雜交所需的濕潤環境,可將其放在盛有少量5×SSC或2×SSC(standard saline citrate, SSC)溶液的硬塑料盒中進行孵育。雜交液的成分和預雜交液基本相同,所不同的是加入了標記的核酸探針和硫酸葡聚糖。

雜交 (1) 盛有2×SSC的塑料盤同,將干烤的濾膜飄浮在液面上,浸濕5分鐘。(2) 將濾膜轉到200ml預洗液的玻璃皿中。濾膜何疊在一起,放于溶液中。用保鮮膜蓋住玻璃皿,放到位于培養箱內的旋轉平臺上。于50℃處理30分鐘。在這一步及以后的所有步驟中,應緩緩搖動濾膜,防止它們粘在一起。(3) 用泡過預洗液的吸水棉紙輕輕地從膜表面拭去細菌碎片,以降低雜交背景而不影響陽性雜交信號的強度和清晰度。(4) 將濾膜轉到盛有150ml預雜交液的玻璃中,在適宜溫度(即在水溶液中雜交時用68℃,而在50%甲酰胺中雜交時用42℃)下,預雜交1-2小時。

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