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武漢貝科新肽科技有限公司
主營：原位雜交,亞細胞定位,蛋白互作,啟動子篩選
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一. 原位雜交天
1. 重新水化和固定
1） 吸取固定好的胚胎，加入50%的PBST溶液，放置5分鐘。
2） 置換成30％的PBST溶液，放置5分鐘
3） 置換成PBST溶液，放置5分鐘，重復一次
4） 置換成4％多聚甲醛的PBS溶液固定20分鐘
5） 用PBST洗兩次，每次放置五分鐘，室溫。
蛋白酶處理與后固定（本實驗不做此步）
1） 用10ul/ml的蛋白酶K在室溫下處理胚胎。5體節(jié)以下的胚胎不處理，5體節(jié)到24小時的胚胎處理3分鐘，24小時以上的胚胎處理5分鐘或者更長。發(fā)育時間越短的胚胎越嫩，可以不用或者少用蛋白酶處理，發(fā)育時間長的胚胎就需要用蛋白酶來疏松組織，原位雜交技術，以便于雜交。
2） 用PBST溶液輕洗，在PBST中放置5分鐘。
3） 用4％多聚甲醛的PBS溶液固定20分鐘，室溫。
4） 用PBST洗兩次，每次放置五分鐘，原位雜交檢測，室溫。
植物組織原位雜交技術在植物基因表達和調控研究中具有廣泛的應用。它可以用來研究植物發(fā)育、生長、逆境響應等方面的基因表達模式和調控機制。例如，可以利用該技術研究植物中的轉錄因子、信號轉導通路、代謝途徑等基因的表達和調控。此外，植物組織原位雜交技術還可以用來鑒定植物中的病原體、檢測植物等方面。
總之植物組織原位雜交技術是一種重要的分子生物學技術，可以用來研究植物基因的表達和調控。它具有操作簡便、結果可靠、應用廣泛等優(yōu)點，是植物分子生物學研究中不可或缺的工具。
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第3年
