阻斷內源性過氧化物酶:滴加3%1甲1醇-H2O2,室溫避光孵育15min,將玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動洗滌3次,每次5min。
預雜交:滴加預雜交液,37°C孵育1h。
雜交:傾去預雜交液,滴加含探針has-circ-ST6GALNAC6 probe 雜交液,濃度6ng/ul,恒溫箱37度雜交過夜。
雜交后洗滌:洗去雜交液,2×SSC,37°C 洗10min,1×SSC,37°C洗2×5min,0.5×SSC室溫洗10min。若非特異雜交體較多,可以增加甲酰胺洗滌。
滴加封閉液:滴加封閉血1清(正常兔血1清),室溫30min。
滴加鼠抗地1高辛標記過氧化物酶(anti-DIG-HRP):傾去封閉液,滴加anti-DIG-HRP。37°C孵育50min,后PBS洗3次×5min。
通過分子檢測協助病理診斷
某些腫1瘤具有特定的分子病理學改變,對于病理常規染色難于診斷的這些腫1瘤,進行分子病理檢測可協助得出準確的病理診斷。例如淋巴1瘤的鑒別診斷往往依賴于形態和免1疫組化的綜合判斷,但有些時候,這些手段也不能滿足診斷的需要,這時我們通過IG或TCR基因重排檢測,可協助鑒別淋巴細胞的普通增殖和腫1瘤性增殖。
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